雞淋巴瘤細胞(DT40)介紹：雞淋巴瘤細胞(DT40)是來自Hyline SC 雞法氏囊淋巴細胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導(dǎo)建株的。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后，建立了DT40 細胞株。這株細胞包含的前病毒基因整合在c-myc 原癌基因的上游，表達的c-myc RNA 水平較高。它缺少一個正常c-myc 基因，但含有兩個拷貝ALV去調(diào)控的myc 基因。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。在IgL 位點，DT40 包含一個重排和一個胚系同源基因。c-rel 基因和v-rel 癌基因在DT40 細胞株中都能誘導(dǎo)組織相容性(MHC)II 類抗原表達。v-rel 誘導(dǎo)的MHCII 表達比c-rel 誘導(dǎo)快，且其有效性在數(shù)周后達到c-rel 的50 倍。這株細胞呈淋巴母細胞表型。傳染性檢測表明DT40 釋放低水平的傳染性RAV-1。雞淋巴瘤細胞(DT40)可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究。

雞淋巴瘤細胞(DT40)特性：

1） 來源：雞淋巴瘤

2） 形態(tài)：淋巴母細胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

雞淋巴瘤細胞(DT40)用途：僅供科研使用。

雞淋巴瘤細胞(DT40)培養(yǎng)步驟：

一．雞淋巴瘤細胞(DT40)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備DMEM 培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，85%；胎牛血清，10%，雞血清，5%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span>細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM 條件下離心4 分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。